Главная»Здоровье»Медицина»Анализы»Критерии качества иммунохимического анализа гормонов

Критерии качества иммунохимического анализа гормонов

Критерии качества иммунохимического анализа гормонов

Качество иммунохимического анализа гормонов оценивают по критериям, общим для всех методов клинических лабораторных исследований.

Любой метод должен быть специфичным, чувствительным, точным и иметь хорошую воспроизводимость результатов. Кроме того, методика анализа должна быть разработана так, чтобы можно было измерять уровни гормонов как в сыворотке, так и в цельной крови и в плазме, а иногда в моче и слюне (если речь идет, например, о стероидах). Еще один важный критерий — минимальное количество и максимальная простота операций, которые должен выполнять персонал лаборатории. Все эти критерии были разработаны до деталей уже в конце 1960-х гг., потому мы сделаем лишь несколько замечаний и комментариев.

Специфичность

Это самый важный показатель качества любого метода иммунохимического анализа. Специфичность можно определить как способность метода обнаруживать в пробе только определенное (анализируемое) вещество и не обнаруживать посторонние вещества, пусть даже очень сходные с ним по структуре. Иначе говоря, специфичность — это способность метода давать минимальное число ложноположительных результатов. Специфичность иммунохимического анализа определяется, прежде всего, специфичностью первичных антител. Она должна быть особенно высока при исследованиях гормонов с идентичными или похожими антигенными детерминантами. Например, аденогипофизарные гормоны ФСГ, ЛГ, ТТГ и ХГ состоят из двух полипептидных цепей — аир, причем а-цепи у них идентичны. Если для анализа какого-либо из этих гормонов, например ФСГ, в качестве первичных антител применяют низкоспецифичную поликлональную антисыворотку, то большая часть антител связывается с а-цепями всех четырех гормонов, поэтому результат измерения оказывается ложноположительным. Описанный феномен называют перекрестной реактивностью. Перекрестная реактивность наблюдается и при измерении пролактина, который относится к одному семейству с СТГ и плацентарным лактогеном (у всех этих гормонов весьма сходны N-концевые аминокислотные последовательности).

Специфичность поликлональных первичных антител можно повысить путем иммуносорбции антисывороток на колонках с соответствующими антигенами. Этот подход широко применялся до появления гибридомной технологии. В настоящее время в качестве первичных антител почти всегда используют высокоспецифичные моноклональные антитела, связывающиеся с антигенными детерминантами, характерными только для данного гормона.

Специфичность иммунохимического анализа зависит не только от свойств первичных антител, но и от множества других, иногда непредсказуемых, факторов. В частности, специфичность может снижаться из-за перекрестной реакции первичных антител с каким-то неизвестным компонентом в анализируемом образце сыворотки или плазмы. Бывают случаи, когда у какого-нибудь сывороточного белка изменяется конформация и из-за этого он приобретает антигенное сходство с анализируемым гормоном. Наконец, компоненты сыворотки могут внедряться в активные центры первичных антител и снижать специфичность их связывания с антигеном. В технологии иммунохимического анализа существует целый ряд способов предупреждения перекрестных реакций, однако все неожиданности предусмотреть невозможно.

Большинство иммунохимических тест-систем предназначено для измерения уровней гормонов в определенных биологических жидкостях человека (сыворотке, плазме, моче, слюне). Соответственно, и специфичность тест-систем установлена для этих биологических жидкостей. Если же такие тест-системы используются для анализа гормонов in vitro, например после инкубации эндокринных клеток в буферном растворе Кребса или Рингера или в какой-либо культуральной среде, необходимо особо проверить их специфичность в таких «нештатных» условиях.

Чувствительность

Чувствительность метода иммунохимического анализа можно определить как минимальную концентрацию вещества, которую можно измерить данным методом. Для оценки чувствительности используют стандартный образец с известной концентрацией гормона или другого антигена. Из этого образца путем последовательных разведений готовят пробы с убывающими концентрациями гормона. Таким образом, чувствительность тест-системы прямо пропорциональна степени разведения стандартного образца, при которой удается получить точный результат измерения. Чувствительность иммунохимической тест-системы зависит прежде всего от аффинности первичных антител, которые в ней используются. Кроме того, чувствительность зависит от типа иммунохимического анализа, на основе которого разработана тест-система. Как правило, чувствительность тест-систем на основе РИА более высока, чем у тест-систем на основе иммунохемилюминесцентного анализа и ИФА.

Для оценки чувствительности используют стандартный образец с известной концентрацией гормона или другого антигена. Из этого образца путем последовательных разведений готовят пробы с убывающими концентрациями гормона. Таким образом, чувствительность тест-системы прямо пропорциональна степени разведения стандартного образца, при которой удается получить точный результат измерения.

Чувствительность иммунохимической тест-системы должна быть такой, чтобы с ее помощью можно было измерять уровни гормона, находящиеся не только в диапазоне его нормальных концентраций, но и ниже этого диапазона. Поэтому разработчики тест-систем стремятся добиться чувствительности между 3-м и 5-м процентилями нормы либо в интервале между двумя и тремя стандартными отклонениями от нижней границы нормы. Например, диапазон нормальных концентраций ЛГ у женщин составляет 1,1—77 МЕ/л (2,3— 162 пмоль/л). Следовательно, чувствительность тест-системы для измерения ЛГ должна составлять примерно 0,4 МЕ/л (0,84 пмоль/л). Столь высокая чувствительность особенно важна, когда требуется измерять низкие концентрации ЛГ, в частности при дифференциальной диагностике первичной аменореи. В данной ситуации уровни ЛГ менее 10 МЕ/л указывают на вторичный (гипогонадотропный) гипогонадизм, а более высокие уровни — на первичный гипогонадизм. Иммунохимические тест-системы должны обладать высокой чувствительностью и в тех случаях, когда требуется уловить даже самое небольшое изменение концентрации гормона. Чаще всего такая задача встает при планировании и оценке эффективности заместительной гормональной терапии. Например, при лечении гипотиреоза дозу левотироксина подбирают по результатам измерений ТТГ. В норме уровень ТТГ колеблется между 0,4 и 4 мМЕ/л (2,9—29 пмоль/л). а современные тест-системы для измерения ТТГ имеют чувствительность не хуже 0,01 мМЕ/л (0,073 пмоль/л). Повторные высокочувствительные измерения ТТГ позволяют эндокринологу очень точно корректировать дозу левотироксина.

Чувствительность тест-системы зависит прежде всего от аффинности первичных антител, которые в ней используются. Кроме того, чувствительность зависит от типа иммунохимического анализа, на основе которого разработана тест-система (РИА, иммунохемилюминесцентный анализ, ИФА). Чувствительность РИА и иммунохемилюминесцентного анализа обычно более высока, чем чувствительность ИФА, поскольку в первых двух методах иммунохимические реакции протекают в жидкой фазе, за счет чего антигенные детерминанты гормонов становятся более доступны для первичных антител. Однако для научно-исследовательских целей производятся и высокочувствительные тест-системы на основе ИФА.

Точность

Это степень близости результата измерения концентрации гормона к ее истинному значению. Точность зависит от чувствительности и систематической погрешности метода: чем больше чувствительность и чем меньше погрешность, тем выше точность. Точность иммунохимических тест-систем оценивают по результатам измерений концентраций гормонов в стандартных образцах.

Воспроизводимость

Это способность метода иммунохимического анализа давать максимально близкие результаты при многократных измерениях концентрации гормона в одной и той же пробе в разных условиях (в разное время, в различных лабораториях). Для оценки воспроизводимости используют как стандартные образцы, так и пробы, полученные от больных. Чтобы добиться высокой воспроизводимости, лаборатория должна в совершенстве владеть методикой работы с данной тест-системой и проводить измерения в стандартных условиях (при одной и той же температуре, одних и тех же длительностях проведения реакций).

Специфичность, чувствительность и воспроизводимость в обязательном порядке указываются в инструкциях и паспортах ко всем имеющимся в продаже иммунохимическим тест-системам и иммунохимическим автоанализаторам. Тем не менее каждая лаборатория должна самостоятельно оценить все эти параметры, особенно воспроизводимость, в реальных рабочих условиях.

  • Оцените материал
    (0 голосов)
  • Прочитано 1816 раз
  • Цирроз печени
    Цирроз печени Истинный цирроз печени представляет конечную, практически необратимую стадию хронических диффузных гепатитов...
  • Базедова болезнь
    Базедова болезнь Базедова болезнь в основном характеризуется усиленным тканевым обменом и повышенной реактивностью нервной системы…
  • Тиреоидит щитовидной железы
    Тиреоидит щитовидной железы Термин «тиреоидит» охватывает воспалительные заболевания щитовидной железы с различной этиологией…
  • Синдром Кушинга
    Синдром Кушинга Хронический избыток глюкокортикоидов, независимо от своей причины, обусловливает симптомы и признаки…
  • Бронхоспазм
    Бронхоспазм Бронхоспазм — состояние острой дыхательной недостаточности, которое возникает в результате бронхиальной обструкции…
  • Гипертонический криз
    Гипертонический криз Развитие гипертонического криза сопровождается следующими симптомами...