ADAMTS13

ADAMTS13

ADAMTS13 — это металлопротеиназа, способная предупредить спонтанную адгезию и агрегацию тромбоцитов и препятствовать образованию микротромбов в зоне микроциркуляции за счет расщепления молекулы фактора Виллебранда в положении Tyrl605-Metl606.

.

Таким образом, в условиях нормы эта протеиназа расщепляет фактор Виллебранда и формирует его мультимеры нормальной и малой молекулярной массы.

Дефицит ADAMTS13 играет важную роль в патогенезе тромботической тромбоцитопенической пурпуры (синдром Мошковица), поскольку при недостаточности этой металлопротеиназы крупные мультимеры фактора Виллебранда обусловливают неконтролируемое формирование микроагрегатов тромбоцитов, блокирующих микроциркуляцию. В последние годы снижение ADAMTS13 обнаруживают не только при микроангиопатических синдромах, но и при хроническом гломерулонефрите, сепсисе, циррозе печени, ДВС-синдроме и многом другом.

Принцип метода

Принцип метода (ELISA) основан на специфическом связывании молекул ADAMTS13 с антителами на поверхности микропланшета. После удаления субстанций, не связавшихся с микропланшетом, проводится инкубация с меченными ферментом антителами (конъюгат). В результате на поверхности микропланшета происходит присоединение антител, меченных ферментом, к уже имеющимся комплексам анти-ген-антитело. Добавляемый после промывки 3,3',5,5'-тетра-метилбензидин позволяет оценить активность фермента по характерному окрашиванию тестируемой смеси. Интенсивность окраски будет пропорциональна активности фермента и, соответственно, количеству ADAMTS13 в пробе.

Реактивы и оборудование

  • Лунки микропланшета, покрытые антителами к ADAMTS13.
  • Буфер для образцов.
  • Промывочный буфер.
  • Раствор хромогена/субстрата (хромоген — тетраметилбензидин, субстрат — перекись водорода).
  • Стоп-реагент.
  • Оборудование для выполнения ELISA (вошер, ридер для планшетов и др.).

Дистрибьютор диагностического набора реагентов — ЗАО «Биохиммак».

Образцы крови для исследования В качестве образца для определения концентрации ADAMTS13 следует использовать БТП из стабилизированной натрия цитратом цельной крови.

Техника выполнения

Последовательность действий врача-лаборанта при определении уровня ADAMTS13 должна строго соответствовать инструкции к набору реагентов. Калибраторы рекомендуется исследовать в дублирующих определениях.

Оценка результатов исследования Для определения концентрации ADAMTS13 необходимо построить калибровочную кривую. На калибровочном графике откладывают величины оптической плотности, полученные при измерении калибровочных образцов. Затем, соединив между собой точки, проводят калибровочную кривую для определения концентрации ADAMTS13 («point-to-point»). В норме концентрация ADAMTS13 составляет 50—140 %.

Интерпретация результатов исследования ADAMTS13 — это металлопротеиназа, расщепляющая фактор Виллебранда. Низкая концентрация и/или снижение активности ADAMTS13 обусловливают идиопатическую тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру (синдром Мошковица). Синдром Мошковица характеризуют пять основных клинических проявлений: неврологические нарушения, дисфункция почек, гемолитическая анемия, тромбоцитопения, лихорадка. Заболевание протекает тяжело, без патогенетически обоснованного лечения смертность достигает 90 %. При синдроме Мошковица нередко обнаруживают снижение концентрации ADAMTS13 менее 10 %. Однако намного более полезным для диагностики этой патологии является определение активности ADAMTS13, поскольку в этом случае кроме количественного снижения можно обнаружить ингибирование этой металлопротеиназы аутоантителами.

Мутации в гене, контролирующем синтез ADAMTS13, способны обусловить частые рецидивы тромботической тромбоцитопенической пурпуры. Клинические проявления наследственного дефицита ADAMTS13 называют синдромом Апшоу—Шульмана (Upshaw—Schulman). При этом синдроме уровень ADAMTS13 составляет менее 6-7 %.

На момент написания монографии, к сожалению, не определены четкие дифференцирующие признаки тромботической тромбоцитопенической пурпуры и гемолитико-уремического синдрома. Однако большая часть специалистов склоняются к мнению, что при гемолитико-уремическом синдроме не наблюдается снижения ADAMTS13, поэтому этот показатель весьма значим для дифференциальной диагностики этих угрожающих жизни состояний.

Причины ошибок

  • Несоблюдение температурного режима хранения реагентов.
  • Нарушение процедуры промывки (при ручной промывке нужно промывать не менее 4 раз).
  • Смешивание реагентов из различных лотов.
  • Конденсация влаги внутри лунок (для предупреждения возникновения конденсата не следует вскрывать пакет до тех пор, пока он не прогреется до комнатной температуры).

Другие аналитические технологии Кроме набора реагентов для измерения концентрации ADAMTS13 существует методика определения активности этой металлопротеиназы. Недостаточная активность обусловлена мутацией либо наличием аутоантител против ADAMTS13.

  • Оцените материал
    (0 голосов)
  • Прочитано 9193 раз
  • Цирроз печени
    Цирроз печени Истинный цирроз печени представляет конечную, практически необратимую стадию хронических диффузных гепатитов...
  • Базедова болезнь
    Базедова болезнь Базедова болезнь в основном характеризуется усиленным тканевым обменом и повышенной реактивностью нервной системы…
  • Тиреоидит щитовидной железы
    Тиреоидит щитовидной железы Термин «тиреоидит» охватывает воспалительные заболевания щитовидной железы с различной этиологией…
  • Синдром Кушинга
    Синдром Кушинга Хронический избыток глюкокортикоидов, независимо от своей причины, обусловливает симптомы и признаки…
  • Бронхоспазм
    Бронхоспазм Бронхоспазм — состояние острой дыхательной недостаточности, которое возникает в результате бронхиальной обструкции…
  • Гипертонический криз
    Гипертонический криз Развитие гипертонического криза сопровождается следующими симптомами...