Тромбиновый тест
Тромбин даже в небольших количествах способен обусловить свертывание крови.
Учет времени коагуляции после добавления в БТП тромбина позволяет получить информацию об эффективности превращения фибриногена в фибрин.
Принцип метода
Принцип метода основан на оценке скорости образования фибрина после добавления в БТП тромбина. Тромбин, отщепляя фибринопептиды А и В от молекулы фибриногена, образует фибрин, поэтому тест позволяет оценить потенциал конечного этапа коагуляции.
Реактивы и оборудование
- Тромбиновый реагент.
- Коагулометр (при отсутствии коагулометра — водяная баня и секундомер).
Образцы крови для исследования Для выполнения тромбинового теста используют БТП. Особенности подготовки образцов БТП детально рассмотрены в приложении 3.
Техника выполнения
В кювету коагулометра (или пробирку при мануальной технике выполнения) вносят 0,1 мл исследуемой плазмы и инкубируют ее. После инкубации в кювету добавляют 0,1 мл тромбинового реагента и в тот же момент включают таймер коагулометра (или секундомер при мануальной технике выполнения). Коагулометр фиксирует время коагуляции автоматически, а при мануальной технике использования регистрируют время появления сгустка, постоянно покачивая пробирку.
Оценка результатов исследования
Время свертывания учитывают в секундах. Поскольку время свертывания в норме зависит от активности тромбина, оценивают время свертывания не только исследуемой БТП, но и контрольной нормальной плазмы. В большинстве случаев причиной удлинения тромбинового теста является наличие в исследуемом образце гепарина, потому в таких ситуациях часто бывает достаточно использование тромбина, имеющего активность 14-17 с. При такой активности тромбина метод демонстрирует весьма низкую вариацию. Однако для выявления дисфибриногенемии и обнаружения действия ингибиторов конечного этапа коагуляции целесообразно использовать такую активность тромбина, которая бы обусловливала коагуляцию нормальной плазмы в диапазоне 25-35 с. В любом случае каждой лаборатории необходимо установить свой диапазон нормальных значений.
Интерпретация результатов исследования
Значительное удлинение в тромбиновом тесте, а зачастую и несвертываемость могут быть обусловлены гепарином. Кроме того, удлинение тромбинового времени (ТВ) наблюдается при гипо-, дис- и афибриногенемиях, на фоне применения прямых ингибиторов тромбина, а также у пациентов с высокой концентрацией ПДФ.
Иногда умеренное удлинение ТВ можно обнаружить при гепатитах. При циррозах, сопровождающихся выраженной гипофибриногенемией, нередко выявляется существенное удлинение ТВ.
Причины ошибок
- Несоблюдение температурного режима хранения реагентов.
- Наличие в исследуемой крови гепарина из венозного катетера.
- Гемолиз.
- Отсутствие или неэффективность системы внутреннего контроля качества.
- Использование нестабильного тромбина.
Другие аналитические технологии
Для оценки ТВ используют тромбин, выделенный из плазмы крупного рогатого скота или из плазмы человека. Существенных различий с точки зрения диагностики нарушений гемостаза между этими реагентами нет.
Близкими по технике выполнения и диагностическим задачам являются анцистроновый и батроксобиновый тесты.