АПТВ тест

АПТВ-тест — один из наиболее распространенных лабораторных способов оценки потенциала коагуляционного гемостаза. Методика определения АПТВ была разработана в 1953 г. исследователями из университета Северной Каролины (США).

Для выполнения этой несложной лабораторной методики необходим АПТВ-реагент, содержащий активирующий и фосфолипидный компоненты. Активирующий предназначен для стимуляции внутреннего механизма коагуляции путем активации фактора Хагемана, а фосфолипидный компонент делает стабильными условия образования теназного и протромбиназного комплексов.

Субстанции, входящие в АПТВ-реагент, индуцируют коагуляцию БТП путем активации внутреннего механизма свертывания, поэтому пролонгация АПТВ наблюдается при недостаточном количестве или функциональной неполноценности следующих коагуляционных факторов: I, II, V, VIII, IX, X, XI, XII. Кроме того, результаты АПТВ-теста изменены при наличии ингибиторов, а также у пациентов, применяющих антикоагулянты.

Принцип метода

Принцип основан на определении времени образования сгустка фибрина после рекальцификации смеси, содержащей цитратную БТП и АПТВ-реагент. Учитывая то, что время коагуляции существенно зависит от состава АПТВ-реагента, техники выполнения, серии и многих других факторов, важно оценить время свертывания не только исследуемой БТП, но и контрольной нормальной плазмы.

Реактивы и оборудование

• АПТВ-реагент.
• Раствор кальция хлорида (0,025 М).
• Коагулометр (при отсутствии коагулометра используются водяная баня и секундомер).

Образцы крови для исследования

Для определения АПТВ используют БТП. Особенности подготовки образцов БТП для исследования системы гемостаза детально рассмотрены в приложении 3.

Техника выполнения

В кювете коагулометра (или пробирке при мануальной технике выполнения) смешивают 0,1 мл исследуемой БТП и 0,1 мл АПТВ-реагента. Затем инкубируют эту смесь при температуре +37 °С в течение 3 мин. После инкубации в кювету (или пробирку при мануальной технике выполнения) добавляют 0,1 мл раствора кальция хлорида, имеющего температуру +37 °С, в тот же момент включают таймер коагулометра (или секундомер при мануальной технике выполнения) и регистрируют время коагуляции.

Оценка результатов исследования АПТВ оценивают в секундах. Каждой лаборатории следует определить свой (локальный) диапазон нормальных значений. В ряде ситуаций удобно использовать индекс Ratio, который вычисляют по следующей формуле:

Ratio = АПТВ(б) / АПТВ(к), где АПТВ(б) — время коагуляции в плазме больного, АПТВ(к) — время коагуляции в плазме здорового человека.

В норме индекс Ratio составляет 0,85-1,25.

Для определения АПТВ используют реагенты, в составе которых имеются различные субстанции, способные активировать фактор Хагемана (каолин, эллаговая кислота, соли кремния и др.). Кроме того, в составе любого реагента для определения АПТВ присутствует фосфолипидный компонент, источник получения которого, а также технология его приготовления у большинства производителей реагентов существенно разнятся. В связи с различиями в составе АПТВ-реагентов АПТВ-тест не является стандартизованным методом исследования и значимо отличается не только при патологии, но и в контрольных исследованиях. Для учета результатов теста полезно разделить имеющиеся на рынке АПТВ-реагенты на несколько групп по преимущественной чувствительности к различным дефектам системы гемостаза.

Интерпретация результатов исследования

Несмотря на низкую специфичность и недостаточную стандартизацию, АПТВ-тест — весьма эффективный способ лабораторной диагностики, повсеместно используемый для скринингового обнаружения дефектов коагуляции, а также мониторинга терапии концентратами коагуляционных факторов у больных гемофилией.

Этот лабораторный тест широко используют для контроля лечения нефракционированным гепарином, поскольку время образования сгустка при таком варианте антитромботической терапии увеличивается пропорционально концентрации гепарина в крови. Следует, однако, отметить, что вследствие короткого периода полураспада нефракционированного гепарина наиболее эффективна оценка антикоагулянтного действия этого препарата при использовании инфузомата. Чувствительность к гепарину у разных АПТВ-реагентов неодинакова, поэтому зачастую наблюдается несоответствие терапевтических дозировок выраженности пролонгации АПТВ-теста. Высокие концентрации гепарина препятствуют коагуляции в АПТВ-тесте, поэтому при кардиохирургических вмешательствах, требующих применения больших дозировок указанного антикоагулянта, этот тест использовать нельзя.

Удлинение АПТВ наблюдается при врожденных дефицитах большинства факторов свертывания, аномалиях фибриногена, коагулопатии потребления, применении кровезаменителей, ингибиторах коагуляционных факторов, болезнях печени, АФС, лечении антикоагулянтами и многом другом.

Укорочение АПТВ весьма часто обусловлено дефектами преаналитического этапа исследования.

Причины ошибок

Неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.

• Попадание в исследуемую кровь гепарина из венозного катетера.
• Гемолиз.
• Отсутствие или неэффективность системы внутреннего контроля качества.

Другие аналитические технологии

Особенности перевода англоязычного обозначения аРТТ обусловили распространение в отечественной литературе двух одинаковых, по сути, наименований: активированное парциальное (АПТВ) и активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ). Для оценки внутреннего механизма свертывания также используют каолиновое и кефалиновое время коагуляции, аутокоагуляционный тест и ряд других методик. Следует отметить, что указанные аналоги обладают значительно меньшей воспроизводимостью в сравнении с АПТВ-тестом.

АПТВ смеси исследуемой плазмы с нормальной бедной тромбоцитами плазмой

Оценка времени коагуляции смеси — это дополнительный лабораторный способ исследования системы гемостаза у пациентов, имеющих удлинение времени свертывания при АПТВ-тесте, в котором врач получает информацию о присутствии в исследуемой плазме ингибиторов коагуляции.

Принцип метода

Принцип метода смешивания основан на том, что при добавлении исследуемой плазмы к нормальной происходит коррекция времени свертывания у больных с дефицитом ка-кого-либо коагуляционного фактора за счет восполнения недостаточности компонентом из нормальной плазмы. Однако в тех случаях, когда удлинение АПТВ обусловлено ингибитором (ВА или ингибитор к какому-либо коагуляционному фактору), нормализации времени свертывания не наблюдается, поскольку происходит угнетение коагуляции ингибирующими антителами из исследуемого образца.

Реактивы и оборудование

• АПТВ-реагент.
• Раствор кальция хлорида (0,025 М).
• Коагулометр (при отсутствии коагулометра — водяная баня и секундомер).

Образцы крови для исследования

Для исследования АПТВ смеси используют БТП больного и нормальную БТП.

Техника выполнения

В кювете коагулометра (или пробирке при мануальной технике выполнения) смешивают 0,05 мл исследуемой плазмы, 0,05 мл нормальной БТП, 0,1 мл АПТВ-реагента и инкубируют эту смесь при температуре +37 °С в течение 3 мин. После инкубации в кювету добавляют 0,1 мл раствора кальция хлорида, имеющего температуру +37 °С, в тот же момент включают таймер полуавтоматического коагулометра (или секундомер при мануальной технике выполнения) и регистрируют время свертывания. Коагулометр фиксирует время коагуляции автоматически, а при мануальной технике использования определяют время образования сгустка, покачивая пробирку.

Оценка результатов исследования

АПТВ смеси исследуемой плазмы с нормальной оценивают в секундах. Тест смешивания является обязательным дополнением АПТВ-теста при обнаружении значимого удлинения времени свертывания.

Для оценки результатов этого теста необходимо определить АПТВ нормальной БТП. В качестве нормальной БТП используют специальные образцы, но можно также применять и сливную нормальную БТП от 3-4 практически здоровых лиц при условии, что все эти образцы имеют нормальные значения.

Интерпретация результатов исследования

При снижении активности коагуляционных факторов происходит нормализация АПТВ в тесте смешивания, однако в тех случаях, когда удлинение времени свертывания обусловлено действием ингибиторов, нормализации АПТВ не происходит.

Как правило, смешивание образца плазмы больного, имеющего удлинение АПТВ, с нормальной плазмой обусловливает укорочение времени свертывания от исходного значения разной степени выраженности (при дефиците коагуляционных факторов более выраженное, а при наличии ингибиторов — менее); однако в ряде случаев после Добавления нормальной плазмы наблюдается парадоксальное удлинение времени коагуляции. Такой феномен встречается при АФС и называется кофакторным эффектом. Кофакторный эффект в АПТВ-тесте наблюдается крайне редко, несколько чаще этот феномен обнаруживают при осуществлении смешивания в каолиновом тесте.

Наличие в исследуемом образце БТП гепарина препятствует коррекции в АПТВ-тесте.

Другие аналитические технологии

D.A. Kaczor et al. предлагают неравное соотношение объемов исследуемой и нормальной плазмы (4:1), что, по их мнению, более четко выявляет ВА с низкой активностью.

В методиках, предназначенных для определения ингибиторов коагуляционных факторов, после смешивания образцов используют увеличенное время инкубации: 15, 60 или 120 мин.

Причины ошибок

• Недостаточное центрифугирование.
• Неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.
• Попадание в исследуемую кровь гепарина из венозного катетера.
• Гемолиз.
• Для выявления ингибиторов волчаночного типа в тестах смешивания необходимо использовать свежую нормальную БТП, поскольку лиофильно высушенные образцы нормальной плазмы в ряде случаев дают ложную коррекцию гипокоагуляции, обусловленной ВА.